一.样本&试剂寄送条件

二．贴壁细胞制备Protocol

1、在超净台内，使用75%酒精擦抹外包装铝箔袋

2、终止铝箔袋，取出内置器皿后，用尖镊将内置爬片取出放入所用培养板或培养皿内，

3、用胰酶消化好细胞，充分奏乐，使之成单细胞悬液（介怀：这一丝很伏击，联系到昔时爬出来片子的质料）

4、补助细胞时，阐发玻片的大小，先在每个孔里准备放爬片的位置滴极少培养基，磋磨是使玻片与培养皿靠培养基的张力粘合到一王人，然后放玻片，防患加细胞悬液时玻片漂起，形成双层细胞贴片。扫数经过介怀无菌操作。

5、阐发我方的需要聘任合适的细胞密度种入培养板内即可。

6、使用细胞爬良晌，（比如在6孔板钟放入爬片，6孔板的孔底面积一样比爬单方面积多出一部分，加细胞悬液时，时常即是细胞铺满扫数孔底，未必，细胞滋长边集景观，即是集聚壁旯旮细胞密度要高一些，这么处于中央细胞爬片上的细胞数目相对较少），相比好的作念法是，将爬片放入孔内后，加细胞悬液时，只滴到爬片上，一直滴到液体布满扫数爬片，但又不易溢出爬片旯旮，放到培养箱里，等细胞贴壁后，取出，再滴加培养基布满扫数孔底，不绝培养，这么爬片上的细胞滋长的密度就会很荟萃。

7、细胞放到爬片上，之后加任何试剂，都应沿培养板板壁极少一丝点倒入液体，直到细胞被液体并吞，开云kaiyun中国官网入口尽量不要把细胞冲到细胞爬片之外！

8、作用一定技能后取玻片。取玻良晌由于玻片与培养皿底诱骗较紧，张力较大，一般将打针器针头针尖向后头弄个小钩，这么将爬片轻轻勾起，用小镊子取出就不错了。如若要作念诸如24h，48h，72h等这么技能点的实际的话，将所需数目的爬片取出时诈欺酒精灯火焰烧一下针头和镊子。末取出的可接着不绝培养。

9、细胞爬片，有多层包装，在超净台无菌景色下盛开包装，未用完的爬片按照原先包装神情再包装起来即可。

10、爬片名义带有正电荷，请勿用手触摸，以免后果欠安！

三．悬浮细胞制备Protocol

取悬浮细胞液，1500-3000rpm离心5min，离心管底部能看到白色细胞团，弃上清；PBS清洗两遍，离心齐集清洗好的细胞，弃上清；加入固定液，重悬，室温固定15-20min。

四．常见细胞容器对应细胞培养量及抗体体积

五．细胞样本关节介怀事项

1、爬片消毒：必须透顶，75% 酒精消毒后需用 PBS 充分洗涤，幸免酒精残留导致细胞亏本

2、固定：幸免使用甲醇 - 丙酮搀杂液固定，稳妥膜卵白但易使细胞皱缩，但会破裂脂质和膜结构。固定剂首选4%多聚甲醛，稳妥膜卵白和大部分胞内卵白，但可能遮掩磷酸化表位，固定后务必PBS洗3次（每次5分钟），透顶去除残留固定剂。

3、细胞吸附：多聚赖氨酸包被不充分或细胞静置技能不及会导致细胞零散，若细胞吸附后果差，可蔓延静置技能至 45min，或进步细胞浓度。

4、细胞密度禁止：不同细胞系的滋长速率和贴壁身手各别较大，冷落细胞在爬片上滋长至 50%～70%汇合度，密渡过高会导致细胞重复，未便于概念不雅察单个细胞的格局和结构影响后续染色不雅察；密渡过低则细胞数目不及，实际收尾不巩固。

5、对照竖立：竖立阴性对照，抹杀非特异性染色烦闷。

6、制备细胞样本的时候冷落一个组别多送几个样本开云kaiyun中国官网入口，实际前都会不雅察选取细胞景色好的使用。